有关53BP1的WB实验求助

请问各位大佬，本人想跑A549细胞中的53BP1蛋白，蛋白大小在两百以上，重复了几次，都看不到蛋白的影子。

所用转膜条件180ma，120min。电泳是80V，30分钟转120V，1小时。