【求助】请问氯霉素和庆大霉素双抗平板中庆大霉素为什么总是会失效？

最近在构建载体，质粒是庆大抗性，菌是氯霉素抗性，用氯霉素和庆大霉素的双抗筛选转进了质粒的菌，但是PCR发现总是没有得到正确的菌株，而且涂板子，双抗的话一般板子上的菌落长得比较少，但是现在长了满板子，进行过好几次试验后发现是双抗板子中的庆大霉素失效了，没有抗住，我就感觉很奇怪，我是按照实验室传统的方法配的双抗培养基，先将LB灭菌，后手摸起来热但不烫的时候加入庆大霉素和氯霉素，庆大霉素浓度为10mg/mL，氯霉素为25mg/mL，按1:1000的比例加入培养基，庆大霉素和氯霉素都是新买的生工的，没有问题，我师兄师姐配出来的双抗培养基也没问题，只有我会失活，好奇怪啊，哭泣。。。。。。请问大家有没有遇到过这样的问题，求助！