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质粒中提,为什么浓度一直很高?

发布于 2023-07-14 · 浏览 2568 · IP 上海上海
这个帖子发布于 1 年零 292 天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。
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以下为本人抽提的步骤:

1. 接菌:用50 mL无菌离心管,加入25 mL LB培养基,随后加入20 μL菌液,此过程需要在超净工作台中进行,开通风。

2. 摇菌:将50 mL无菌离心管管盖稍微拧上后(以不掉为准),保证空气可以进入,随后放入37℃摇床中过夜。

3. 离心:将摇菌后的离心管管盖拧紧后,以4200rpm,4℃,离心10 min。弃上清液(弃除的上清液加入一定的84消毒液灭菌),保留离心沉淀物(即细菌)。

4. 往每个离心管中加入500 μL Solution Ⅰ(4℃保存),涡旋震荡10 s,使细菌充分裂解。

5. 将4的液体转移至新的2 mL离心管中,加入500 μLSolution Ⅱ,用手上下颠倒混匀,静置2 min。

6. 在5中每管加入700 μL Solution Ⅲ,用力上下颠倒混匀(摇200下左右),于13000×g离心10 min。

7. 将离心后的上清液转移至吸附柱中(紫色的柱子),每次转移700 μL,13000 rpm离心1 min。上清液可分多次转移。

8. 弃除废液后,往吸附柱中加入500 μL HBC,13000 rpm离心1 min。

9. 倒掉废液,吸附柱中加入700 μL DNA washbuffer,13000 rpm离心1 min。

10. 倒掉废液,13000 rpm空转2 min。

11. 取1.5 mL离心管,将吸附柱放入离心管中,用吹风机吹干(1 min左右)

12. 吸附柱中加入的80 μL ddH2O(提前55℃温育) ,枪头不要戳中吸附膜。13000 rpm离心2 min。

按照说明书,浓度在700左右是正常的,但是我的每次都是1000以上,甚至还有2000多的,A260/280在1.85-1.95之间,请问为什么?其中Solution Ⅰ已经加了RNA酶,已经尽可能的去除RNA污染了。

谢谢各位大佬解答,感恩!

最后编辑于 2023-07-14 · 浏览 2568

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