你说，这些RNA提取问题，你遇到过哪个？小师妹说全中！

实验汪应该都已经习惯了一种痛苦，叫做 RNA 提取：

• 只要一做 RNA 提取，一天到晚提心吊胆，操作步骤繁多姑且不说，研磨、抽提、离心，一天忙到晚，结果一检测，啥都没有…
• 最近好不容易论文到了查重阶段，也是一顿操作猛如虎，一看查重二百五…
• RNA 提取到底是怎么了？删了两千多字，改的快跟小学生一样了，还是一片红...关键是，无论怎么看和别人重复的内容，都没在其他文章里看过啊，问题到底出在哪？

这些非常容易忽视的问题，你遇到过哪个，应该如何解决？

1.RNA「热化了」

因单链结构，RNA 非常不稳定，需要用超低温抑制 RNA 酶的活性。为了防止 RNA「热化了」，经常使用大量液氮充分研磨样品，或者在冷冻室内储存。但往往 RNA 又经不起冻，怎么办呢？

可将样品浸泡在稳定试剂中，致使 RNA 酶失活，在采集时就保留样品的基因完整性。这方面 DNA/RNA Shield 可以储存各种类型的样品，在环境温度下也可运输。冷链不再是必须的，进行敏感的下游分析当然更加靠谱 ～

2.做实验的「感染了」

病毒 RNA 在提取后也仍然具有传染性，在提取时，实验人员需要佩戴口罩和手套等各种防护装备，以防实验室污染。而有种「自动灭活」的方法，在更加便利的同时，也能更好的保护实验人员的安全。

遵守美国疾病控制中心（CDC）的病原体灭活指南，DNA/RNA Shield 可裂解并有效灭活样品中的病原体，包括最坚韧的病毒也不在话下。

3.RNA「发酶了」

许多样品中含有高水平的 RNase，这种酶也会加速 RNA 的降解。为了使这种酶对降解的影响最小化，最好在采集时就稳定好样本中的 RNA。

这种情况下，可以在裂解缓冲液中立即进行溶解。比如可以通过 TRIzol®、RNA 裂解缓冲液等使 RNase 失活，然后再处理样本。另外，再采集样本之后马上加入 DNA/RNA Shield，可以快速降解掉 RNase 等蛋白物质。当然，DNA/RNA Shield 也会保证取样时微生物基因多样性不会发生改变。

4.RNA「难产了」

RNA 的产量和质量也是另无数人头疼的问题，最佳方法是保证样品完全裂解，但相同的裂解方案换了一个样本可能就没辙了。

为了提高裂解效果，可以将裂解缓冲液与机械裂解步骤（研磨珠破碎）匹配，或者在裂解液上游加入酶裂解步骤（如蛋白酶 K、溶菌酶等）。

5.「黑化的」DNA

DNA 的存在会使基于 UV/VIS 的定量方法（如 Nanodrop）发生偏差，从而人为地提高 RNA 的定量，使其高于实际水平。在更敏感的下游应用（例如 RNA-seq）中，DNA 还可能导致错误读数，这样的 DNA 简直就是「黑化的」了！

这种问题可以通过 TRIzol^® 相分离、DNA 去除柱、DNase 处理等多种方法解决。同时，确认 DNA 存在的最快方法是使 RNA 样本可视化（如琼脂糖凝胶，AgilentTapeStation^® 等等）, 寻找 28S 核糖体 RNA 带上方的任何高分子量片段。

当然，通过 qPCR 或 Qubit 等方法也可以实现，若正在执行对 DNA 污染敏感的下游应用，这种方法则更可取。

由 Zymo Research 开发的新型 RNA 提取试剂盒，也能达到消除 DNA 污染的目的。该试剂盒具有新的缓冲液和离心柱体系，包括用于柱上处理的 DNase I，可以结合和提取 RNA。并且消除了提取后 DNA 酶处理和清理步骤的需要，简化了从提取到下游应用的过程。

看到这里，你对 RNA 提取的信心是不是重新回来了！