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【求助】请问可以这样做shRNA设计么

发布于 2007-08-27 · 浏览 881 · IP 湖北湖北
这个帖子发布于 17 年零 285 天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。
现在一般的对于载体介导的shRNA,插入序列,
一般都遵循:5'-酶切位点-sense-loop-anti-sense-酶切位点-3'
所以往往会超出60nt,这样一来,合成的价格就会大大高于普通合成。而且出错的可能性也高于普通。我想能不能这样做。
合成两段短的引物序列,然后中间匹配20nt左右,然后用搭桥PCR进行。然后用两头的酶,进行酶切。在连上载体,不知可行否?
还有,我在两头能否用两套酶切位点,这样就可以适用不同的载体系统了?
举个例子:
5'-GAATTC-AAGCTT-GACTAACGTCAGCGGAGCG-loop-CGCTCCGCGCTGACGTTAGTC-3'
EcoRI HIndIII
5'-CTGATTGCAGTCGCCTCGC-loop-GCGAGGCGCGACTGCAATCAG-AAAAAACCA-GAGCTC-GGATCC
SalI BamHI
中间的sense和anti-sense是瞎编的,不必追究。
望各位大虾执教










最后编辑于 2022-10-09 · 浏览 881

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