大肠杆菌感受态类型：做质粒转化你需要知道的感受态使用信息

为进行重组质粒的筛选，通常将环化的重组质粒转化到大肠杆菌感受态中，利用质粒不相容性质挑选单克隆（这解答了很多同学的问题“连接上的质粒和空载会不会转到同一质粒”）；利用质粒复制特性，带origin的质粒能诱导大肠杆菌启动DNA复制机制，转入的质粒依赖于大肠杆菌中的DNA复制酶和dNTP完成自我复制，这样我们可以对质粒进行富集（当然不是所有的都是ori）。感受态按照作用可以分为三类，通用型、大肠杆菌蛋白表达系统型、特殊功能修饰型。

一、通用型是指用于筛选单克隆和后期用于富集质粒的感受态，因为着重在筛选，所以很多此类感受态带有lacZΔM15基因型。

• 1. DH5a菌株

DH5a是一种常用于质粒克隆的菌株。E.coli DH5a在使用pUC系列质粒载体转化时，可与载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α-互补。可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株。

基因型：F-,φ80dlacZΔM15,Δ(lacZYA-argF)U169,deoR,recA1,endA1,hsdR17(rk-,mk+), phoA,supE44,λ-,thi-1,gyrA96,relA1。

• 2. JM109菌株

该菌株在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化或用M13 phage载体进行转染时，由于载体DNA产生的LacZa多肽和JM09编码的LacZΔM15进行α-互补，从而显示β-半乳糖苷酶活性，由此很容易鉴别重组体菌株

基因型：recA1,endA1,gyrA96,thi-1,hsdR17,supE44,relA1,Δ(lac-proAB)/F’[traD36, proAB+,lacIq,lacZΔM15]

• 3. TOP10菌株

该菌株适用于高效的DNA克隆和质粒扩增，能保证高拷贝质粒的稳定遗传。

基因型：F-,mcrAΔ(mrr-hsd RMS-mcrBC),φ80lacZΔM15,△lacⅩ74,recA1,Δ(ara-leu)7697,galU,galK,rps,(Strr) endA1,nupG

• 4. HB101菌株

该菌株遗传性能稳定，使用方便，适用于各种基因重组实验

基因型：supE44,hsdS20(rB-mB-),recA13,ara-14,proA2,lacY1,galK2,rpsL20,xyl-5,mtl-1,leuB6,thi-1

• 5. Stbl3菌株

由HB101改造而来，比起HB101更容易转化，并且生长能力更旺盛，而且质粒容量是HB101的10倍，能够降低慢病毒表达载体和其他逆转录病毒载体中的长末端重复片段(LTR)的同源重组频率。

二、大肠杆菌表达系统感受态是专门改造服务于体外蛋白表达的宿主，搭配纯化技术可以将目的蛋白进行富集，此类宿主搭配载体上的高效启动子，以及修饰掉宿主表达抑制基因，能高效表达载体的基因。

• 1. BL21(DE3) 菌株

该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体（如pET系列）的基因。T7噬菌体RNA聚合酶位于λ噬菌体DE3区，该区整合于BL21的染色体上。噬菌体高效的RNA聚合酶配合载体的T7启动子，实现蛋白高效启动、表达。该菌适合表达非毒性蛋白。

基因型：F-,ompT,hsdS(rBB-mB-),gal,dcm(DE3)

• 2. BL21(DE3) pLysS菌株

该菌株含有质粒pLysS，因此具有氯霉素抗性。PLysS含有表达T7溶菌酶的基因，能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰目的蛋白的表达。该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。

基因型：F-,ompT hsdS(rBB-mB-),gal, dcm(DE3,pLysS,Camr)

• 3. M13和M15

M13和M15主要适用于QIAGEN公司的pQE系列的表达质粒，其内部含有一个能编码乳糖抑制蛋白的质粒，pREP4。含卡那霉素抗性基因。pREP4含p15A复制子，保证它能与含ColE1的pQE质粒共存于M15宿主细胞。乳糖抑制蛋白能严格调控pQE质粒的表达。可以通过IPTG诱导表达。（部分同学可能又会过度解读质粒不相容性，质粒不相容是针对相同复制系统的，这里有两种复制子）

三、特殊功能修饰的宿主，为了让载体具备某些特性而改造的载体，如甲基化酶缺失宿主。

• JM110或SCS110

要排除dam,dcm甲基化的影响，需要用特定的dam-,dcm-的菌株，如JM110。大多数大肠杆菌菌株中含有Dam甲基化酶和Dcm甲基化酶，前者可以在GATC序列中腺嘌呤N-6位上引入甲基，后者在CCA/TGC序列的第一个胞嘧啶 C-5位置上引入甲基。 常用的菌株都会产生dam,dcm，从而受到甲基化的影响.

部分限制性内切酶对甲基化的DNA不能切割，如FbaI和MboI等，一般生物公司提供的内切酶说明中均有说明。大多数酶切位点的甲基化不影响切割，而有些会影响，如XbaI，BclI等。而且甲基化只发生在特定序列，以XbaI为例，只有在位点序列旁出现GA或TC，该XbaI位才会被甲基化。

而要解除这种限制修饰作用通常有两种方法：

（1）选用上述酶的同功酶，如Sau3AI，DNA识别切割位点与MboI相同；但不受甲基化影响；

（2）利用甲基化酶缺失的受体细胞进行DNA的制备，如E.coli JM110和链霉菌（SCS110）等，前者Dam和Dcm甲基化酶已敲出，而后者细胞内本就没有甲基化酶，从这些细胞中抽提的DNA就能被上述酶切割。

更多的感受态使用信息可以参考下面链接，感受态自行制备方法可以查看我之前的帖子。

参考网页： https://www.thermofisher.cn/search/browse/category/us/zh/90222229/%e6%84%9f%e5%8f%97%e6%80%81%e7%bb%86%e8%83%9e?viewtype=tableview&query= *%3A*&resultPage=2&resultsPerPage=15。