腺病毒载体的最新选择,促进国内基因治疗科研的成果转化
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国家人类基因组北方研究中心
对外开展重组腺病毒构建包装服务
通过与美国Vector Biolab公司合作，国家人类基因组北方研究中心（北京诺赛基因组研究中心有限公司）利用优越的实验条件和训练有素的科研人员，成功构建的一个集克隆、包装、扩增、纯化为一体的重组腺病毒构建技术平台。从2005年7月成立腺病毒小组并开展实验至今，为课题组内部完成包装200多个腺病毒，为Vector Biolab公司成功包装近300个腺病毒，并且进入美国市场。
本系统是以Ad5血清型E1/E3缺陷型腺病毒DNA为骨架的复制缺陷型重组腺病毒系统，通过对比其他系统（包括Adeasy、Adeno-X、AdMax等系统），对穿梭载体，病毒骨架载体和包装细胞系都做了改进，并做了大量的实验和重复验证工作后，使得该系统比上述系统有了更强大的优势，可提供高品质、高产量的重组腺病毒。并且在克隆、包装、扩增、纯化、滴度测定等各步条件也做了改进和优化，达到了克隆阳性率更高、质量更可靠、包装稳定、出毒迅速、滴度高等效果。在此基础上，还拓展了更广泛的应用，可以提供各种带报告基因的（如GFP、RFP、Luciferase、LacZ等），带不同标签的（如HA、myc、His、Flag等）腺病毒构建和包装服务及RNAi重组腺病毒的构建和包装服务。所包装的腺病毒已成功应用于信号转导，基因转位，Co-IP，动物实验，干细胞研究，原代细胞研究，神经细胞研究等科研实验。并且可以完成较高难度的克隆构建，包括具有细胞毒性作用基因的腺病毒构建，在短时间内完成从原始质粒到病毒DNA的构建工作。
为促进国内相关领域的研究进展，国家人类基因组北方研究中心（北京诺赛基因组研究中心有限公司）计划从2006年4月开始，对国内实验室开展重组腺病毒构建、包装及扩增服务，可以由客户提供自己的基因，完成腺病毒构建、鉴定、包装的服务，也可以由客户直接选购本中心已经构建好的腺病毒，提高科研工作的效率。
我们的宗旨是：“提高科研效率，成就健康事业！”
技术路线：
（一）载体构建：
1） 克隆目的基因到穿梭载体及鉴定，根据客户不同要求需要3-10个工作日；
2） 克隆目的基因到腺病毒载体pAd及鉴定，需要3-5个工作日。
（二）病毒包装、扩增：
1） 将鉴定正确的病毒DNA转染293细胞进行包装， 12-14天即可出毒，保留毒种（第一代病毒）；
2） 将包装好的病毒进行扩增，结束后保留毒种（第二代病毒）；
3） 将扩增所得第二代病毒进行滴定，滴定结果单位为PFU/ml（一般为10(10)pfu/ml以上，体积为500μl以上）；
4）将第二代病毒进行扩增，得到第三代病毒；
5）第三代病毒进行大量扩增并纯化，得到第四代病毒，纯化后病毒滴度可以达到10(11)pfu/ml以上,体积在2ml以上
质量控制与鉴定：
1） 测序鉴定
2） 酶切鉴定
3） 根据特定引物作RT-PCR鉴定
4） 蛋白表达鉴定（根据客户要求并由客户提供高特异性抗体）
5） OD260/280
6） 滴度测定
客户须知：
对于客户所要构建腺病毒的目的基因，客户须提供详细的基因相关信息，包括基因序列，载体序列，载体图谱。
载体构建步骤所需时间，根据不同构建方案，需10到20个工作日。
从合同签订之日起，客户需交纳首期技术服务费（20%服务费），方可进行实验。服务结束时一次结清余款。
客户需提供的信息及材料：
1） 插入目的片段序列信息，原始载体序列信息，载体图谱，酶切分析图等。
2） 鉴定正确的原始质粒，鉴定用PCR引物，RT-PCR引物
3） 原始质粒的酶切鉴定报告、测序报告。
4） 实验目的、要求，目的基因有无细胞毒性，是否需要构建对照病毒？
5） 实验要求包括：是否要求更换启动子、polyA等基因元件？
6） 实验目的包括：用于细胞实验还是动物实验，需要感染的细胞类型或动物模型类型。
我们的承诺：
1） 构建腺病毒载体的时间约10到20个工作日；病毒的包装，小量扩增的时间约15到20个工作日；大量扩增纯化需要15到25个工作日；滴度测定及RT-PCR验证需要3到7个工作日；总计从载体构建到包装，出毒，扩增，纯化，滴度测定需要50-70个工作日；
2） 提供重组穿梭载体，重组腺病毒载体的酶切及测序报告；
3） 选择我们的载体系统，提供更快捷的服务；
4） 选择我们的载体系统，保证100%的包装成功率；
5） 选择我们的载体系统，可包装任何有细胞毒性作用的基因；
6） 选择我们的载体系统，提供高品质，高产量的重组腺病毒。
国家人类基因组北方研究中心
（北京市诺赛基因组研究中心公司）
联系人：郭金海
Tel：67883332-868/814
Email：adeno_service@yahoo.com.cn
2006年11月15日
对外开展重组腺病毒构建包装服务
通过与美国Vector Biolab公司合作，国家人类基因组北方研究中心（北京诺赛基因组研究中心有限公司）利用优越的实验条件和训练有素的科研人员，成功构建的一个集克隆、包装、扩增、纯化为一体的重组腺病毒构建技术平台。从2005年7月成立腺病毒小组并开展实验至今，为课题组内部完成包装200多个腺病毒，为Vector Biolab公司成功包装近300个腺病毒，并且进入美国市场。
本系统是以Ad5血清型E1/E3缺陷型腺病毒DNA为骨架的复制缺陷型重组腺病毒系统，通过对比其他系统（包括Adeasy、Adeno-X、AdMax等系统），对穿梭载体，病毒骨架载体和包装细胞系都做了改进，并做了大量的实验和重复验证工作后，使得该系统比上述系统有了更强大的优势，可提供高品质、高产量的重组腺病毒。并且在克隆、包装、扩增、纯化、滴度测定等各步条件也做了改进和优化，达到了克隆阳性率更高、质量更可靠、包装稳定、出毒迅速、滴度高等效果。在此基础上，还拓展了更广泛的应用，可以提供各种带报告基因的（如GFP、RFP、Luciferase、LacZ等），带不同标签的（如HA、myc、His、Flag等）腺病毒构建和包装服务及RNAi重组腺病毒的构建和包装服务。所包装的腺病毒已成功应用于信号转导，基因转位，Co-IP，动物实验，干细胞研究，原代细胞研究，神经细胞研究等科研实验。并且可以完成较高难度的克隆构建，包括具有细胞毒性作用基因的腺病毒构建，在短时间内完成从原始质粒到病毒DNA的构建工作。
为促进国内相关领域的研究进展，国家人类基因组北方研究中心（北京诺赛基因组研究中心有限公司）计划从2006年4月开始，对国内实验室开展重组腺病毒构建、包装及扩增服务，可以由客户提供自己的基因，完成腺病毒构建、鉴定、包装的服务，也可以由客户直接选购本中心已经构建好的腺病毒，提高科研工作的效率。
我们的宗旨是：“提高科研效率，成就健康事业！”
技术路线：
（一）载体构建：
1） 克隆目的基因到穿梭载体及鉴定，根据客户不同要求需要3-10个工作日；
2） 克隆目的基因到腺病毒载体pAd及鉴定，需要3-5个工作日。
（二）病毒包装、扩增：
1） 将鉴定正确的病毒DNA转染293细胞进行包装， 12-14天即可出毒，保留毒种（第一代病毒）；
2） 将包装好的病毒进行扩增，结束后保留毒种（第二代病毒）；
3） 将扩增所得第二代病毒进行滴定，滴定结果单位为PFU/ml（一般为10(10)pfu/ml以上，体积为500μl以上）；
4）将第二代病毒进行扩增，得到第三代病毒；
5）第三代病毒进行大量扩增并纯化，得到第四代病毒，纯化后病毒滴度可以达到10(11)pfu/ml以上,体积在2ml以上
质量控制与鉴定：
1） 测序鉴定
2） 酶切鉴定
3） 根据特定引物作RT-PCR鉴定
4） 蛋白表达鉴定（根据客户要求并由客户提供高特异性抗体）
5） OD260/280
6） 滴度测定
客户须知：
对于客户所要构建腺病毒的目的基因，客户须提供详细的基因相关信息，包括基因序列，载体序列，载体图谱。
载体构建步骤所需时间，根据不同构建方案，需10到20个工作日。
从合同签订之日起，客户需交纳首期技术服务费（20%服务费），方可进行实验。服务结束时一次结清余款。
客户需提供的信息及材料：
1） 插入目的片段序列信息，原始载体序列信息，载体图谱，酶切分析图等。
2） 鉴定正确的原始质粒，鉴定用PCR引物，RT-PCR引物
3） 原始质粒的酶切鉴定报告、测序报告。
4） 实验目的、要求，目的基因有无细胞毒性，是否需要构建对照病毒？
5） 实验要求包括：是否要求更换启动子、polyA等基因元件？
6） 实验目的包括：用于细胞实验还是动物实验，需要感染的细胞类型或动物模型类型。
我们的承诺：
1） 构建腺病毒载体的时间约10到20个工作日；病毒的包装，小量扩增的时间约15到20个工作日；大量扩增纯化需要15到25个工作日；滴度测定及RT-PCR验证需要3到7个工作日；总计从载体构建到包装，出毒，扩增，纯化，滴度测定需要50-70个工作日；
2） 提供重组穿梭载体，重组腺病毒载体的酶切及测序报告；
3） 选择我们的载体系统，提供更快捷的服务；
4） 选择我们的载体系统，保证100%的包装成功率；
5） 选择我们的载体系统，可包装任何有细胞毒性作用的基因；
6） 选择我们的载体系统，提供高品质，高产量的重组腺病毒。
国家人类基因组北方研究中心
（北京市诺赛基因组研究中心公司）
联系人：郭金海
Tel：67883332-868/814
Email：adeno_service@yahoo.com.cn
2006年11月15日
