急，急， 急, 大分子蛋白的WB
求助：大分子蛋白（560KD）wb方案，我目前用的是7.5%分离胶，电泳150V（冰水浴）知道70KD marker跑到胶的最下面。转膜是低温湿转，1%SDS+10%甲醇，300mA转膜5h（每90min换冰团子保持转膜液冰），但是每次跑出来大分子的条带都是糊的，给我吧信心都搞没了。求助有经验的大佬，主要是我跑这个蛋白就算了还要跑它的磷酸化蛋白？
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求助：大分子蛋白（560KD）wb方案，我目前用的是7.5%分离胶，电泳150V（冰水浴）知道70KD marker跑到胶的最下面。转膜是低温湿转，1%SDS+10%甲醇，300mA转膜5h（每90min换冰团子保持转膜液冰），但是每次跑出来大分子的条带都是糊的，给我吧信心都搞没了。求助有经验的大佬，主要是我跑这个蛋白就算了还要跑它的磷酸化蛋白？
