Wb经验贴‖page 1配胶

直接干货，不参水，我会连更，直至写完。以下我主要讲湿转法，具体其他方法的我不做具体的讲解，以下内容，仅做一些参考，望请大家批评指正。（因为本人实验记录本不在身边，所以有一些我尽量配图和数据，如果没有具体的数值和图，大家可以网上参考一下，都差不多）

1:两块胶的选择

我们首先要明确目的蛋白的分子量是多少，根据分子量去选择合适的分离胶浓度，不同分子量有比较好的分离胶浓度。

2:配胶的间隔时间、高度等问题

先配分离胶，一般一个板5ml左右，夏天的话凝的慢，冬天快，大概20±5分钟左右，这个时间不是固定的，具体情况具体分析:1）倾斜玻璃板，如果胶凝了，它是不会动的。2）如果是用异丙醇压的分离胶，凝了以后会发现一条很明显的线，这就是证明好了。

1、分离胶配好以后，用什么压？

我看过用无水乙醇，也有水的，我们是异丙醇压，压的效果比较好，我推荐这个，分离胶的平面会比较直（有人吐槽wb条带跑出来是歪的，不在一个平面，这也是一个原因）

2、分离胶厚度和高度有什么讲究吗？

一般选择1mm 梳子可以插进去的分离胶厚度，这个跑得好看一些，那么高度有讲究吗？有！讲究很大，浓缩胶厚度要占据1cm高，不然实验条带会胖墩墩的。原因是:浓缩胶的厚度不够，怎么能够到达同一个点去分离啊？类似于，百米冲刺赛跑也🉐同一个起点吧！

（如上图，一部分原因是浓缩胶的高度不够问题）

3、加入浓缩胶有什么注意的吗？

第一个是厚度问题，上面已讲。

第二个，就是你用其他的东西压了分离胶，毕竟不是同一个东西，所以加分离胶之前，必须把那些压的东西去掉（比如异丙醇），我必须倒掉吧！有些时候有异丙醇的小水珠，那就用吸水纸吸掉呗。

第三个:插梳子的话，尽量一气呵成，不要插一下，觉得歪了，再拔出来，不行！绝对不行！就算你巧夺天工，也会使得加样孔会有点把残留，造成wb条带歪七扭八的！注意一气呵成，一气呵成！（先把梳子对准孔洞，两个大拇指分别放在梳子两边，一下子推下去，这时候小心别被溅到了，因为有毒，有毒！）

那么拔梳子也是，必须一气呵成，下面的是我的示范图（大拇指扣中间，一下子拔出来，不要犹豫，犹豫就会败北！）

第四个:

我插完梳子之后，等待10分钟左右，他就会凝的差不多，这时候我建议你用吸水纸包着，打湿一下，放密封膜里面，放4°冰箱，冷藏1h以上，跑出来风味更佳哦！不要问我为什么，没有为什么？！有人要问了，我可以放外面晾干一个小时吗？不行！绝对不行！一定不行！因为你把这个放外面胶会干缩了，所以插完梳子，立马保湿，立马送冰箱！快，送去！同样的分离胶也不要太长时间！！！

4、我配胶有气泡啥问题啊？

1:浓度高会有。2:这个你配完以后，放冰箱里面保湿，水喷多了就会有。3:你没混匀也是一种可能。但是不影响实验结果，不影响使用。

5、注意混匀和添加顺序等

有些人不会混匀，然后仪器也比较拉，那么请用5ml的枪吸完上下在液体内部吹打，不要在外面，不然你的溶液有气泡，枪吸取困难。细胞实验也是如此，混匀操作是养过细胞的人都知道的方法

（当然也分情况:在你枪溶液里面有气泡加入分离胶孔板了也不要怕，异丙醇压的时候会把气泡弄走，那么浓缩胶就不行了，就必须加多一点浓缩胶溶液把气泡浮起来了。）

还有就是分离胶和浓缩胶都有temed，这个东西有神经毒性，少吸一口，多活十年！！！！这个玩意促凝，你不加这个，胶不会凝，所以你加完这个立马混匀处理加入孔板！同样的你配完分离胶可以配浓缩胶，只要不加temed就好！

6:不会还有人漏胶和碎玻璃板吧？

解决方法，第一个拉伸缩带垫在底部，取配完胶后的板的时候，去掉就好，这个还好，也不容易漏！第二个就是技术操作了，要领如下:先把两块板放桌面对齐，紧挨着，确定两块板齐了，再放固定架上，放上去以后，用大拇指从上往下按压三个点（两边加中间）确保板下缘和橡胶垫贴合了！

还有固定的时候，不要同时推那个夹子，不然会碎，不然会碎，不然会碎！一边先推，再推另一边！！！！！

加胶的溶液的时候，从一个角加进去，不要从中间，这样的话，可以排气泡（上面第5点有讲）！！！

这是今天的，下面的请听下回分解，如果有用评论一个666！