【求助】有关WESTERN 中遇到的几个问题,希望能分享经验,积极讨论
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1, 裂解后,加了loading buffer并变性了的蛋白,-20度保存是否会降解,如果会,那"半衰期"大概多长;如果不会,那么后来越跑胶感觉信号越弱是什么原因呢,是溶液配置后放置得太久的缘故吗?
2, 跑完胶后,考马染出的条带不够清晰,是什么原因导致呢,胶配置的疏忽还是电压的问题?
3, 暴光后,目的条带出来的同时许多其他条带也出现了,我的一抗(1:750)是单抗,RT2小时,二抗(1:1000)RT1小时,PBST wash 4X10MIN. 想问下,出现杂条带的原因是什么呢,按道理来说单抗不是应该只与目的抗原作用吗?
4, 做WESTERN时,应该注意的细节问题是什么呢,望给予指导
2, 跑完胶后,考马染出的条带不够清晰,是什么原因导致呢,胶配置的疏忽还是电压的问题?
3, 暴光后,目的条带出来的同时许多其他条带也出现了,我的一抗(1:750)是单抗,RT2小时,二抗(1:1000)RT1小时,PBST wash 4X10MIN. 想问下,出现杂条带的原因是什么呢,按道理来说单抗不是应该只与目的抗原作用吗?
4, 做WESTERN时,应该注意的细节问题是什么呢,望给予指导
