WB之血泪踩坑史

在经历了四个月的WB跑胶漏样,条带散乱的血泪史后,今天终于做出了成功的实验结果。
四个月来总是跑胶漏样的感悟:在配制好下层胶后放置20分钟就可以,不必待下层胶完全凝固,因为下层胶完全凝固的话上层胶粘合的是已经硬化的下层胶,上下层胶的粘度不够,胶与胶之间缝隙的闭合性不强,导致跑胶容易漏样。之前的四个月总是踩坑的原因是对WB跑胶的原理理解不够深入,总是认为是下层胶凝的不够牢导致跑胶漏样,所以是越错越远。现在改为下层胶凝20分钟,上层胶凝30分钟没有再漏过样。
蛋白样品的制备:之前在未漏样的情况下条带也是散乱的,后来改用别人已经制备好没有问题的蛋白样品后跑出了完美的条带,事实证明蛋白样品质量不合格同样也能导致WB跑胶转膜失败。



