PCR 基因全长克隆不出来怎么办

1.目的基因全长序列是通过深度测序得到的，全长2760bp，从ATG开始到TGA结尾，蛋白序列翻译也很完整

2.上下游引物是直接从头尾设计的各20bp，Tm值60，但是用DNAMAN看了一下，两条引物的5'端都有大概6个碱基组成的环

3. 现在这条基因一直扩不出来，尝试过温度T，换了许多次模板（用其它基因的引物验证过模板没有问题），也用诺唯赞 takara 生工的Taq酶进行尝试过都没有条带。但是有一次用takara的酶扩出了400bp的条带（确定不是因为污染产生的）。

4. 做过巢式PCR，从上下游各100bp内的非编码区设计了引物，扩出的序列4000多，完全不对。

5. 也找了其它同学帮我做过，仍然是没有条带。

求教各位老师同学们，还有没有其它方法可以尝试，或者其它设计引物的方法（我导师说全长引物最好从头尾设计，这样的话如果设计更长的引物也避不开5’端的环）。这个基因对我真的很重要，后面的实验全靠它了～～，还请有经验的盆友帮忙回答一下，不胜感激！！