绝望求助。wb转膜只有marker没有样本蛋白
这个帖子发布于 5 年零 320 天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
WB按照实验室protocal重复两个月，结果都是一模一样的——转膜后PVDF膜上只有marker没有样本蛋白。怕转过，把300mA 90min的转膜改成了60min，结果还是有marker没蛋白。特意把膜和胶都染了丽春红，依然没有蛋白条带出现（之前上ECL，连内参也没有显像）
把困惑跟实验室的师兄师姐讲了，说我这种不可能到不行。
也许是蛋白有问题？
但我每次做蛋白都是按照protocal新提的呀？10的7次方细胞沉淀用200ul RIPA（弱）重悬；冰上裂解30min；超声破碎3-5秒×3-5次，间歇5秒；4℃ 14000rpm×10min离心，取上清，-80℃储存。BCA有浓度，基本都有10mg/ml±，难不成还都是杂质？
到底是哪里有问题？绝望到想退学，连wb都跑不出来还毕个屁的业，不如趁还年轻赶紧去奶茶店上班。
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汇报近况。被老板判定为“不想搞实验”，调离实验室啦
永别了，WB
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