chip 实验中背景太高，IgG富集的和目的抗体量差不多……
发布于 2018-12-26 · 浏览 3207 · IP 上海上海
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我用的是小鼠的成纤维细胞，用病毒感染后，最好定量为1.25E05/CHip反应。
甲醛封闭，甘氨酸终止。超声到500bp左右。
先用没加抗体的beads pre cleaning,上清和目的抗体过夜，第二天再用封闭的beads沉淀。
wash 按低盐、高盐、licl的次序各洗了两遍，每次10min.
但我最后的产物用qPCR检测都很奇怪。
input的cycle 大概是12左右，IgG 富集的很高，跟 RNAPii差不多
比如 GAPDH input 22 IgG26 RNAPii 28
病毒基因GB INPUT 17 IgG18 RNAP II 18
之前做出来过，所以怀疑是buffer的问题，重配了几次都不管用，请教各位大神，大概是哪个环节出了问题呢？
IgG 用的是millipore兔抗， RNAPII 用的是stanta cruze 的
最后编辑于 2022-10-09 · 浏览 3207
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