microRNA跑PCR，内参不齐怎么办？
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各位战友，本人最近在用RT-PCR跑microRNA的过程中发现一个很大的问题，就是内参怎么都调不齐，无论是组间还是组内，内参的差异都很大，特向大家请教！
提RNA:Trizol法
逆转录:用的TAKARA试剂盒，把只是把引物换成了microRNA和其内参U6的逆转录引物
RT-PCR:LC480,10ul体系
结果:
如图，红框标出来的是对照组，下面的是实验组，前面那一列标的是目的miRNA，后面标的是内参U6。今人困惑的是我测过cDNA的浓度，组内差别不是很大，但是跑PCR内参却差别很大，U6差别大的两个样，miRNA的表达量却差不多。我做的H2O2的细胞氧化应激模型，组间内参差异大可以理解，但组内差异如此大却让我百思不得其解，此处U6与microRNA的表达似乎不存在指向性，这是为什么呢？？？
提RNA:Trizol法
逆转录:用的TAKARA试剂盒，把只是把引物换成了microRNA和其内参U6的逆转录引物
RT-PCR:LC480,10ul体系
结果:
如图，红框标出来的是对照组，下面的是实验组，前面那一列标的是目的miRNA，后面标的是内参U6。今人困惑的是我测过cDNA的浓度，组内差别不是很大，但是跑PCR内参却差别很大，U6差别大的两个样，miRNA的表达量却差不多。我做的H2O2的细胞氧化应激模型，组间内参差异大可以理解，但组内差异如此大却让我百思不得其解，此处U6与microRNA的表达似乎不存在指向性，这是为什么呢？？？
最后编辑于 2022-10-09 · 浏览 6405
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