求助 有做TRAF6的WB的吗 一直跑不出来
发布于 2016-07-14 · 浏览 3038 · IP 山西山西
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WB新手 最近在做TRAF6的WB abcam的一抗 按说明书上标的最大比例 1比2000稀释 （使用脱脂奶粉和碧云天的一抗稀释液都试过） 分子量在58KDa附近 一直没有条带，内参GAPDH 很齐
细胞用10mg/L LPS 刺激24 和48h 使用的RIPA+PMSF 裂解 电泳是80V跑到底
200ma 2h 转膜 脱脂奶粉 封膜1H 10min TBST 洗5次 一抗4度封闭1天2夜， TBST 10min每次 洗膜5次
二抗 室温 1h TBST 10min 洗膜 5次 曝光
已经进行了好几次了 也试过加大上样量 TRAF6 一直出不来条带
之前曾用这个抗体进行过免疫组化
请教 我该怎么进行下一步检测 进一步加大一抗浓度？ 提高上样量？？还是？？？
最后编辑于 2022-10-09 · 浏览 3038
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