Wb经验帖‖条带数据分析之image j工具使用及条带数据的认知

一般而言，我没记错的话，wb对于ng级别的蛋白都能检测，对于蛋白测定主要是一个定性分析。什么是定性分析？什么是定量分析？学过理工科的都知道。

一：直观感受

我看到的实验室，都是跑wb都需要一种既视感----强弱明显有差别，一眼看出强弱，也就是我显影page里面的图和“若隐若现的”的描述。

二：不能直观感受

不能直观感受，以某某期刊，某某人发表的文章为例。

（以上wb的图都挺不错的，都能发了核心期刊，没有其他的意思，期刊也很不错，文章也不错，这个期刊我也发了两篇文章，所以不存在任何贬低或者歧视，如有侵权，请联系删除，以上纯属公益性学术分享内容）

这个你发现，有些图是不能直观看到差别的，这时候你需要明确的知道大概的灰度，从而进行一个对比。

关于条带对比的话，我讲讲我的见闻：

1：如果内参一致差不多情况下，就还是直接看其他功能蛋白（目的蛋白）的变化。

2：如果内参不一致，那么进行比值进行分析。

（这在我之前关于一个帖子回复里面有描述，一个同学问的，我有回复，可以去看看）

3：实验室选择的大多第一种，第二种我在一些sci上看到过，不推荐。

三：如何使用image j

（同样的，我没带电脑来医院，所以分享帖子，希望你们看看，知乎原创：

兄弟们，可以去给个关注，他做的确实不错，但是经验帖看我的没问题，让你明白的挠挠的，同样的下面的内容如有侵权等，请联系删除，纯为公益性质的分享学习）

如何使用Image J进行条带灰度分析？如Western Blot条带、酶切核酸条带等的相对定量分析。

用Image J 进行条带灰度分析的详细步骤：

第一步，首先打开软件，通File→Open 打开要分析的胶图，或直接拖拽胶图至软件即可识别；

第二步，如果胶图为黑底白带，则需要反色：点击Edit→Invert，如下图所示，变为白底黑带（用于示例的胶图质量较差，见谅）

第三步，将胶图通过Image→Type→8-bit（如下图）将图片转为8位的灰度图，即从黑到白有256（0~255）种灰色的黑白图片：

第四步，将胶图的灰色背景去掉：依次点击PROCESS→Subtract Background→ Rolling ball radius: 50.0 pixels, 勾选Light Background（去掉背景的过程从上图至下图）

第五步，用矩形选框工具（工具栏第一个）框选同一行的所有条带，如下图所示：

第六步，完成第五步的框选后，按Ctrl+1，紧接着按Ctrl+3，得到峰形图：

第七步，用如下图所示的直线工具，将所有6个小峰图封闭起来：

上图：封闭前，下图：封闭后（封闭后才可单独计算每个峰面积）

第八步，选择魔法棒工具，依次点击封闭后的各个小峰，即可得到灰度值：