【求助】用茎环法进行miRNA pcr时内参U6和引物问题
发布于 2015-06-24 · 浏览 3.3 万 · IP 北京北京
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最近做miRNA pcr自己设计引物，看了半天很是不明白几个问题！
1. U6作为内参 它的逆转录引物是U6A，但是为什么在PCR时它的下游引物又是通用引物了呢？为什么不是U6S和u6A呢？u6本身没有加环这个按照环所设计的通用引物怎么能够P出U6呢？是否这个茎环的设计就是根据U6的序列来设计的呢？
2.u6A逆转录是和miRNA一管还是单独的一管呢？
3.设计miRNA的引物时提示TM值过低，通过在5‘端加碱基来提高退火温度，这个碱基是只能加G还是别的也可以有什么限制吗？
实在想不明白了，求大神指点下！！！！！！！！！！
1. U6作为内参 它的逆转录引物是U6A，但是为什么在PCR时它的下游引物又是通用引物了呢？为什么不是U6S和u6A呢？u6本身没有加环这个按照环所设计的通用引物怎么能够P出U6呢？是否这个茎环的设计就是根据U6的序列来设计的呢？
2.u6A逆转录是和miRNA一管还是单独的一管呢？
3.设计miRNA的引物时提示TM值过低，通过在5‘端加碱基来提高退火温度，这个碱基是只能加G还是别的也可以有什么限制吗？
实在想不明白了，求大神指点下！！！！！！！！！！
最后编辑于 2022-10-09 · 浏览 3.3 万
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