【原创】动物组织与细胞涂片的油红O染色技术（个人总结）

不久前在园子里应助了个关于油红O染色的帖子，近期有多个朋友询问相关技术。

为此，在这里单独开贴，总结“动物组织和细胞涂片的油红O染色技术”的操作方法和注意事项。

本帖内容全是个人经验，在实验方法方面若有冲突之处，欢迎探讨！

一、染色液的配制

1. 油红O染色液的配制

油红O染色液分储备液和工作液。

①油红O储备液的配方：100%异丙醇100 mL+0.5 g油红O干粉，充分溶解，过滤，4度避光保存。

②油红O工作液的配方：实验前，将储备液与蒸馏水按3:2稀释，过滤（滤纸或极性滤膜配1mL注射器），酒红色且无沉淀。现配现用原则，避免工作液出现沉淀。

2. 60%异丙醇的配制

60%异丙醇的配方：100%异丙醇60 mL+蒸馏水40 mL，4度保存。

二、动物组织的染色方法

1.冰冻切片的制作

关键步骤：

①组织固定：多聚甲醛（4 g干粉+100 mLPBS，为了加速溶解可以加热至60度或加入少量NaOH），4度保存。

②组织脱水：多聚甲醛换10%蔗糖，沉底；换20%蔗糖，沉底；换30%蔗糖，沉底。

③切片过程不做赘述，园子里有相关帖子（油红O染色用组织，例如脂肪肝、脂肪组织，应切10微米，不能太薄）。

④贴片：室温放置一会。

⑤切片保存：-20度保存。

2.组织切片的油红O染色

关键步骤：

①取出冻存的切片，室温回温，蒸馏水浸洗，洗掉包埋剂。

②60%异丙醇浸洗2min（提前润洗一下，便于油红O着色）。

③油红O工作液染色2-5min，具体时间自己控制。

④60%异丙醇调色（建议严格控制时间，时间太长颜色就褪掉了）。这一步可以在显微镜的辅助下进行，调出自己想要的颜色。

⑤调色结束后，立即水洗。

⑥苏木精复染（严格控制时间，1min以内）。

⑦盐酸酒精分化1-5s（严格控制时间，酒精可以溶解脂质）。

⑧流水反蓝。

⑨甘油明胶封片（水性封片剂）.

自己做的油红O染色切片：

SCI论文中的油红O染色切片（后期补充）：

仅专业人士可见

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三、动物细胞的染色方法

1.细胞涂片的制作

关键步骤：

①细胞悬液的制备：根据实况，将细胞稀释，过稀过密都影响染色效果。

②涂片：用蓝*头或玻璃棒，将细胞稀释液均匀涂到载玻片（建议采用防脱片）上。

③贴片：室温放置，至片子风干。

④固定：多聚甲醛固定5分钟，动作轻柔，避免冲掉细胞。室温放置，至片子风干。

⑤切片保存：-20度保存。

2.组织切片的油红O染色

关键步骤：

参照动物组织实验部分。

自己做的油红O染色切片：

SCI论文中的油红O染色切片（后期补充）：