急性心梗小鼠 方向：造模、动物及细胞实验的学习（连载中）

心内科硕研一下，正在集中练习心梗造模以及心梗相关表型的实验，坐标上海。

现分享一些实验的过程

一、小鼠急性心梗造模相关知识细节和要点；

小鼠品系：

C57，6-8w，雄鼠；

造模所需硬件：

小动物麻醉机（900元左右），空气泵，加热垫，冷光源，鼠板，器械若干（尖头蚊氏钳）；

方法学参考文献：见附件；

实验要点以及难点：

1. 小鼠挤心脏的过程；
2. 心脏挤出后结扎的速度；
3. 小鼠心脏结扎后，结扎位置的固定以及心超结果的稳定

操作细节以及解决方法：

1. 保证手术区域的整洁与有序；
2. 保证麻醉深度的足够，剪皮肤之前捏捏鼠尾保证麻醉深度，麻醉深度不够极易失败；
3. 在将小鼠固定时牢固固定小鼠的左右上肢，不需要固定下肢，也是为了可以更加顺手的进行挤心脏的步骤；
4. 在进行正式练习之前现对小鼠进行解剖，充分了解从表皮哪里开口可以到第三肋间和第四肋间；
5. 钝性分离胸大肌以及胸小肌要彻底，C57的胸小肌很薄，在分离的过程中不要多次分离，避免胸小肌的破裂，导致后面气胸的发生；
6. 挤心脏的手法有两个关键点：一是食指与拇指给向右向下用力，保持胸廓整体的压力；二时刻留意心尖的位置，往往阻碍心脏顺利挤出的部分就是在心尖，通过蚊氏钳的下压以及旋转，还有大拇指的调整使得心尖能够对着胸廓的破口；
7. 挤出心脏时需有序的采用手按压胸廓→扎针→手指按压胸廓轮流交替的方式，保证挤出的心脏不会弹回胸廓内；
8. 心脏结扎的定位主要靠心大静脉以及整体心脏的走行，目前我的进针定位是在心大静脉末端分支处上2mm，左2mm位置，进针浅切宽，大概有接近4-5mm的心脏下行针；
9. 手术结束后甚至在扎针时立马结束麻醉状态，有助于小鼠呼吸的恢复
10. 文献中的挤压胸廓排气的步骤要切实，而不是做做样子，要切实的挤压并且明显感觉气体被挤出的状态

目前状态：可顺利挤出心脏，结扎且保证一定的存活率；未打心超对最重要的射血分数进行评价

目前练习心梗小鼠数量：200

二、TTC染色

因为只是心梗老鼠，不是再灌，只进行TTC单染，不用伊文思蓝进行染色，这是第一次染色结果，被师姐评价为没染上，打算按着各大论坛以及各种protocol上的方法进行改良后再次尝试TTC染色

三、打算进行的心梗相关实验：

心超

心重体重比

Masson三色染色

HE染色

石蜡包埋及切片

WGA染色

结晶紫染色

CCK-8

LDH释放

免疫荧光染色：α-Actinin细胞骨架染色,DAPI

心肌收缩力，跳动速率改变

成年心肌细胞的提取

细胞缺氧干预