A549细胞移植瘤模型个人经验

A549细胞移植瘤模型一些个人经验

这周刚刚完成了药效试验，开个帖子聊一下自己的一些经验吧。之前在网上看到很多资料都说A549细胞成瘤性差，建模时间长，正好自己的课题也会用到A549模型，心里还是比较担心的。然后丁香园上看到不少帖子也介绍了A549移植瘤模型构建方法，方法大同小异，主要还是细节上会有一些差异。

首先是细胞，接瘤前细胞状态一定要好，这是能否成瘤的关键因素。什么算状态好呢？我接瘤前细胞是1传3,1天长满，感觉这个程度应该是比较合适的，当然长得越快越好。另外不能有污染，我在做预实验的时候细胞被支原体污染了，8只裸鼠瘤都没有长出来。细胞培养的话用的是DMED高糖培养基，为什么不用1640？因为实验室这一株一直用的DMED，状态也很好，就一直没有换。个人感觉培养基不是关键性因素，只要能保证细胞状态就好。

其次是老鼠，我买的是BALBc的裸鼠，雄性，周龄4周。不需要免疫缺陷更高的老鼠，性别雌雄皆可，选择雄鼠主要是因为雄鼠耐操，我的药比较毒，怕给药毒死了。周龄很关键，建议选择四周的，抵抗力低，接瘤成功率高。有的帖子说买回来的老鼠要养1周适应下环境，个人觉得没有必要，我是买回来过了两天直接接瘤。

第三接种量，A549需要的接种量很大，我是按照1000w/只接的，因为总共要接72只老鼠，接种前养了15个225cm的大瓶子，养到吐血。每个225瓶子长满大概能收获5000w个细胞，一瓶225接5只鼠。除了接种量，基质胶对成瘤也有影响，而且加入基质胶长出来的肿瘤大小比较均一，后期取瘤拍照比较好看。当然基质胶也有缺点——贵！5ml 2000多块钱，也不是人人都负担的起。

然后讲一下接瘤当天的一些操作，先消化细胞，如果用的是225的瓶子要注意观察，角落里的细胞有时候会消化不下来，会影响接种量。然后离心取细胞沉淀，加入PBS混悬，冰浴中加入等体积基质胶混悬。混悬之后放置在冰浴中拿到动物房，开始接瘤，右侧腋下皮下每只老鼠接种0.1ml。接种的具体操作这边就不赘述，可以看一下论坛里其他的帖子。这中间有几个细节要注意一下

1、消化速度要快，保证细胞的活力。我是上午9点开始消化，15大瓶细胞消化到11点，拿去接瘤，11:40全部接种完毕。

2、细胞消化下来以后全程放在冰浴上，一方面保障细胞活力，另一方面防止基质胶固化。

接种完成之后剩下的就是等待了，有的帖子说要A549成瘤要1个月左右，而且成瘤率不高。我自己的做的时候3天就有实体瘤长出来了，5天长到100左右，第7天开始给药的时候基本都在200mm3左右，有的大的已经400mm3了，成瘤率接近100%，只有一只鼠的瘤子没有长出来。自己也没有想到居然长得这么快，总结了一下原因可能是接种前细胞状态比较好，体外长得飞快；另一方面要归功于基质胶。

以上就是A549移植瘤模型的一些个人经验，关于瘤块埋置和皮下接瘤那个好，个人觉得皮下接种好一些，操作简单方便，如果皮下接种瘤长不出来再考虑瘤块埋置吧。图片就附上瘤子最大的一只鼠吧，第7天，体积700mm3。