小鼠缺血再灌注急性肾损伤模型（IRI）经验总结

目前急性肾损伤模型最常见的有缺血再灌注损伤模型和药物诱导的AKI两种，其中缺血再灌注损伤AKI模型又有多种方法，比如双侧肾蒂夹闭、单侧肾蒂夹闭、单侧肾切除等方法，因为目前主要做双侧肾蒂夹闭的IRI模型，所以分享一下经验总结，互相学习~

1.物品准备：保温垫（2个）、动物理发器（1个）、手术器械：镊子（3-4个）、眼科剪（2个）、微动脉瘤夹（多个）、持针器、4-0和5-0带针缝合线（如果一次做得多就带多点）、 1ml注射器、棉签、纱布、生理盐水、麻醉药（4%水合氯醛）、手术操作板、消毒巾等。

2.动物选择：文献中建议周龄8-12w大小的雄性C57BL/6，同一批实验的小鼠周龄相差应＜1周，雄性小鼠对AKI更易感。

3.麻醉： 腹腔注射（腹中线外0.5cm、头低尾高位、进针深度小于1cm为宜）4%水合氯醛，0.1ml/10g；剃毛，然后用 70% 的酒精棉签将手术区域的皮肤擦干净，置于保温垫上，使体温回升。

4.手术造模：在这里手术部位就引用文献当中的图，更加直观，是最佳手术部位。

来源文献：Am J Physiol Renal Physiol. 2012 Dec 1;303(11):F1487-94.

小鼠放在保温垫上，沿背部切开左侧的皮肤和肌肉，露出左肾，切口位于小鼠背部 1/3 处，切口大小为 1-1.5 cm（如上图）。然后用无菌棉签将肾脏从切口中推出以暴露肾蒂。用镊子稍微去除肾蒂周围的脂肪组织，将左肾放回腹腔。右肾蒂采用类似的方法去除周围组织，但右肾位置不同，切口更靠近肋骨，肾蒂准备好后，两个肾脏都放回腹腔中。用棉签轻轻地将右肾推出体腔，露出肾蒂，用微动脉夹住，记录右肾缺血时间，可以观察到肾脏从红色变为深紫色，表明夹闭成功。观察到肾脏颜色变化后，将肾脏放回腹腔。然后夹闭左肾蒂，记录缺血时间。左右肾钳夹之间有大约相差 1-1.5 分钟的时间。这里最好分别记录每侧的缺血时间，以确保两个肾脏缺血时间相同。

缺血时间足够后，松开动脉夹，开始再灌注，可以观察到肾脏由深紫色变为红色，然后分别缝合肌肉层（连续缝合，不要留有空隙，容易感染和愈合不良），再缝合皮肤（间断缝合），结束后立即给每只小鼠腹腔内注射0.5 ml温热的无菌盐水。然后将动物放在加热垫上，直到它完全清醒，然后再放回笼子，因为术后小鼠活动不佳，这里要用水泡一些饲料放在笼子里，方便小鼠补充能量和水分，恢复更快。

5.缺血时间：可能是由于实验目的不同，不同的文献夹闭肾蒂的时间不同，大部分文献的缺血时间在20-40min不等，具体夹闭多久还要取决于自己的实验目的和操作，同时还要保证存活率和实验效果，可以设置多个缺血时间的组别，进行探索，选择存活率较高、最适合自己实验的缺血时间。

用上述方法造模后，存活率和模型成功率达99%，所以分享了自己造模摸索的一些经验总结，欢迎大家指正，互相交流学习~

时常感觉科研路上太孤单无助，羡慕别的同学有和蔼可亲的老板、耐心有爱的师兄师姐手把手教做实验，而自己却需要一个人不断摸索，练习，但我愿意相信，这样的成长过程也一定能收获满满~一起加油！

参考文献：

Wei Q, Dong Z. Mouse model of ischemic acute kidney injury: technical notes and tricks. Am J Physiol Renal Physiol. 2012 Dec 1;303(11):F1487-94. doi: 10.1152/ajprenal.00352.2012. Epub 2012 Sep 19. PMID: 22993069; PMCID: PMC3532486.