【求助】克隆基因启动子，PCR总扩增不出来
发布于 2012-07-18 · 浏览 5482 · IP 北京北京
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最近老板要求克隆一个基因（ALCAT1）的启动子，从UCSC查得了TSS前2000，后100的序列，准备克隆扩增
用NCBI的primer blast设计的引物
F：CAAAGAATGATCCTGGTACAATAGC
R：TCCGTAGGGGTCACAACCTC
没加酶切位点
PCR20ul体系
酶用的2X Taq Mix 10ul
primer 各 0.5ul
293T genome 2ul(约1ng)
水 7ul
PCR条件是 94℃预变性 3 min，94C变性 15S，退火49C -59C 30s，72C 2min，30个循环；72C 5 min，4C终止反应。
但P完之后完全得不到特异性条带……跑胶显示一片空白……
求高人指点啊啊
用NCBI的primer blast设计的引物
F：CAAAGAATGATCCTGGTACAATAGC
R：TCCGTAGGGGTCACAACCTC
没加酶切位点
PCR20ul体系
酶用的2X Taq Mix 10ul
primer 各 0.5ul
293T genome 2ul(约1ng)
水 7ul
PCR条件是 94℃预变性 3 min，94C变性 15S，退火49C -59C 30s，72C 2min，30个循环；72C 5 min，4C终止反应。
但P完之后完全得不到特异性条带……跑胶显示一片空白……
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最后编辑于 2022-10-09 · 浏览 5482
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