【求助】曝光后胶片上出现泳道样条带
这个帖子发布于 18 年零 9 天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
请大家帮我分析一下原因，操作如下：
1.封闭：5%脱脂奶粉，2h
2.按照marker将一张膜剪成两块，分别孵育目的蛋白（CST说明书1：1000）、actin一抗，4度过夜
3.TBST洗膜：10min*2次，5min*1次
4.RT孵育不同的二抗，其中目的蛋白（1：2000），都是1h
5.洗膜：10min*2次，5min*1次
6.ECL显色：5min左右
曝光后发现有目的蛋白的膜上除了目的条带，附近还有泳道样条带；但是actin条带清晰，背景也很干净。自己分析原因可能是一抗、二抗比例过高，不知道应该调整其中一个还是两个的比例？如果想用这两块膜重新做该怎么处理？我现在用TBST洗膜的话要多久？要重新封闭吗？
1.封闭：5%脱脂奶粉，2h
2.按照marker将一张膜剪成两块，分别孵育目的蛋白（CST说明书1：1000）、actin一抗，4度过夜
3.TBST洗膜：10min*2次，5min*1次
4.RT孵育不同的二抗，其中目的蛋白（1：2000），都是1h
5.洗膜：10min*2次，5min*1次
6.ECL显色：5min左右
曝光后发现有目的蛋白的膜上除了目的条带，附近还有泳道样条带；但是actin条带清晰，背景也很干净。自己分析原因可能是一抗、二抗比例过高，不知道应该调整其中一个还是两个的比例？如果想用这两块膜重新做该怎么处理？我现在用TBST洗膜的话要多久？要重新封闭吗？
