【求助】PVDF膜转溴酚蓝!
我最近在做一个小分子量蛋白的Western(7kD)。转膜9mA过夜(12h)(湿转)。
最后没有做出目的条带来。我觉得转膜时的现象很奇怪。
1)我这次做Western用的是PVDF膜(0.22um孔径 Pall)。我发现溴酚蓝没有转到膜上。而我们原来用NC膜的时候,溴酚蓝是可以转移到膜上的。我想问一下溴酚蓝是否可以转移到膜上?
2)还有不知道转膜的条件是否合适?
3)再加个问题:我跑胶(12%的胶)的时候,为了跑得开一点,跑了1个半小时,而之前我们只跑1个小时。我想问一下做过小分子Western的战友。跑小分子蛋白,跑胶的条件怎么样?跑胶时间长一点,还是短一点比较合适