【求助】WB内参β－actin总出现两至三条带，郁闷

做WB已数月，连内参β－actin都没做清楚，郁闷至极！！各位大侠帮忙！
我做的是输卵管的WB，用RIPA抽提，4条输卵管加120ul裂解液。santa cruz一抗，碧云天二抗，还试过sigma、北京博奥森一抗，santa cruz二抗，结果都大同小异。显色剂是pierce的化学发光试剂盒，还试过santa cruz试剂盒，显影定影使用自动洗片机（其他人做结果都很好），压片时间十秒以上就可见背景，每次只做内参都出现两到三条带，郁闷！！！
一抗现在已经稀释到100万倍！二抗8000倍，请教各位大侠，你们有用过如此高的稀释倍数吗？！郁闷的是为何还是两条带！
每次上样为15ul，没有测浓度，原来测过，好像是1ug/ul，按这样算也只上十几ul。假如上样太多，是否会出现两条带？
各位帮帮忙，谢谢大家！！