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【交流】大家做连接时有没有碰到这个问题

医疗行业从业者 · 最后编辑于 2022-10-09 · IP 湖北湖北
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这个帖子发布于 18 年零 182 天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。
最近在做胶回收时,遇到这个问题:
我酶切时片断是准确的,比如说 载体大片断是5kb,插入小片断是1kb,但当我胶回收之后(我用的是OMEGA胶回收试剂盒),我想在连接之前跑胶看看我片段的亮度,结果发现,我的两个片断都变大了,小片断1kb变成1300,大片段5kb变成6kb。 但是我做的连接并不受影响,连接产物也能长出克隆,可是我挑的克隆酶切后,小片断还是在1300 ,回不到1kb去了。分析原因:
是不是电泳时加入的燃料嵌和入DNA中,导致质粒DNA刚性变强,以至再次电泳时变慢,但是一般的胶回收试剂盒是可以去掉燃料的呀(我用的是Sybergreen染的),后来我又用了Qiagen的胶回收试剂盒,还是一样的结果。

不知道各位战友有没有碰到过类似的情况,大家帮我分析一下吧



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