Con A sepharose
发布于 2003-11-30 · 浏览 1829 · IP 广东广东
这个帖子发布于 21 年零 161 天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
我用Con A sepharose 亲和层析提取牛眼IRBP,一种分子量为140kDa的糖蛋白，层析前SDS-PAGE证实有IRBP存在，进一步利用Con A sepharose 亲和层析进行纯化，但洗脱出来的只有杂蛋白带，没有IRBP洗脱出来，请教高手，可能有哪些方面的原因呢？整个试验都做了好长时间了，非常着急！
其中我用的 Con A sepharose 是我老板以前的学生用过的，我用下列方法进行了再生：
1）: 用0.5M NaOH洗涤， 200～400ml 不等
2)：双蒸水洗至中性
3)：用0.5M HCl洗涤
4)：双蒸水洗至中性
5)： 放入双蒸水中4℃ 贮存
将Con A sepharose 进行上述处理后，我重新应用。我怀疑是不是Con A sepharose 的问题，不能再用了。
缓冲液我重新配置过几次，每次都是同样结果，可以排除是缓冲液的问题了
我用的是10.5×1.0 cm的层析柱，上样量为80ml，洗脱杂蛋白所用buffer为100ml， 洗脱IRBP所用buffer为60ml.
请问有哪些原因影响我的试验结果，多谢指教
其中我用的 Con A sepharose 是我老板以前的学生用过的，我用下列方法进行了再生：
1）: 用0.5M NaOH洗涤， 200～400ml 不等
2)：双蒸水洗至中性
3)：用0.5M HCl洗涤
4)：双蒸水洗至中性
5)： 放入双蒸水中4℃ 贮存
将Con A sepharose 进行上述处理后，我重新应用。我怀疑是不是Con A sepharose 的问题，不能再用了。
缓冲液我重新配置过几次，每次都是同样结果，可以排除是缓冲液的问题了
我用的是10.5×1.0 cm的层析柱，上样量为80ml，洗脱杂蛋白所用buffer为100ml， 洗脱IRBP所用buffer为60ml.
请问有哪些原因影响我的试验结果，多谢指教
最后编辑于 2022-10-09 · 浏览 1829
2 收藏点赞
