干细胞消化时间和吹打次数求助

请问小鼠胚胎干细胞R1消化，看到圆亮就终止消化，可以轻拍吗？拍打会不会刺激到细胞？

后续重悬，吹打要吹几下合适啊，有没有同仁摸索过吹打对细胞的影响呢 ？吹多了会不会导致细胞贴壁效率下降啊？

吹打不吹很多下吹不成单细胞，怎么办？有什么好的吹打方法吗？

我目前是消化1min，对着皿底吹10次把细胞吹下来，然后离心重悬，再用200ul培养基重悬40下，取传代需要的量加入1ml培养基吹匀20下，再打到培养皿里面。就这样的情况下还有一些5～6的细胞团，以及一些2个成对的细胞球，后面生长的时候，有3～4个克隆大的离谱。