科研小白的脂肪干细胞培养日记
yj1984ren 推荐这个帖子发布于 4 年零 241 天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
旨在记录实验过程，总结实验不足之处、改进方法及结果，欢迎朋友们一起讨论分享～
①人脂肪抽吸获得物，每5 mL脂肪分装入50 mL离心管，以1︰2的比例加入10 mL 0.075%的Ⅰ型胶原蛋白酶（感觉消化不是很彻底，下次准备用更高浓度的胶原酶），放入37 ℃恒温摇床消化1 h（但是因为中午去吃饭，消化时间延长了大概半小时）。
②加入与胶原等量的细胞培养液10 mL以中和胶原酶。细胞培养液由基础培养液、体积分数为10%胎牛血清和1%的双抗构成。4 ℃下400×g离心10 min，弃上清及未完全消化的脂肪。细胞培养液重悬，经过200目的细胞筛过滤至新的50 mL离心管，4 ℃下400×g离心10 min，弃上清。
③用1mL 10%的红细胞裂解液重悬(每5 mL脂肪用1 mL红细胞裂解液)，室温孵育5 min，加入PBS，4 ℃下400×g离心10 min，弃上清（有的文献上没有写要用红细胞裂解液）。
④细胞培养液5ml重悬，转移至25cm2的培养瓶，标记细胞类型、代数、时间等，放入37 ℃、体积分数为5%CO2、95%湿度条件的温箱培养。
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