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[求助]怎样找用于引物设计的mRNA全序列?

肿瘤内科医师 · 最后编辑于 2022-10-09 · IP 广东广东
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这个帖子发布于 19 年零 213 天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。
各位前辈大家好,本人想设计几个基因的RT-PCR引物,因为不是搞生化的所以有些基本问题没弄清楚,向各位专家们请教一下:
第一、用于引物设计用的mRNA是否一定要该目的基因的mRNA全长序列?我在NCBI中找到的mRNA有些只说明是那个因子的mRNA,有些还标明complete CDS,但往往那些标有complete CDS的反而更短,且没有多聚腺苷酸尾,还有那些没标到complete CDS的mRNA也长度不一,我想知道究竟那个才是可用于引物设计的mRNA?
第二、可能这个问题是引物设计的原则问题,但我查了好些资料都没找到相关介绍。引物设计时上下游引物是否都要设地密码子区(Codon)或都在非密码子区,因为有些因子的mRNA虽然很长,但密码子区却很短,如果一定要在密码子区设引物的话恐怕不易,不知是否可以一条引物设地密码子区,另外一条就设在非密码子区,以上的做法有什么区别吗?希望那位热心的园友帮一下忙,先谢过了。

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