[求助]怎么PCR老是做不出来结果
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/viewer.fcgi?db=Nucleotide&dopt=GenBank&val=13325059
LOCUS NM_000104 5128 bp mRNA linear PRI 16-OCT-2005
我先设计一组引物,分别为
5’-primer: 5'-AATTAAGATCTTATGGGCACCAGCCTCAGCCC-3' 位置在309-328
3’-primer: 5'-CCGTGTCGACTTATTGGCAAGTTTCCTTGGC-3' 位置在2155-2174
当然,5'端加了约10个bp的碱基用作酶切位点和保护碱基,但反复从细胞的cDNA库中只能扩增出约1100kb的条带,而全长条带引该是1629bp;
后设计第二组引物,
5’ primer:5‘-CACTGGAAACCGCACCTC-3‘, begin at 347bp
3’primer:5’-TTGCCTCTTGCTTCTTATTGG-3‘, end at 2018bp
the whole length is 1672bp.
扩增程序为:Denaturing step at 94°C 3 min. And then Denaturing step at 94°C 50 sec, annealing at 58°C 40sec, and extension at 72°C 90 sec for a total of 35 cycles. After the last cycles, mixture maintain 5 min. and then, stop the reaction, store mixture at 4Cº。
但反复扩增,只能在胶上看到约80~90kb的引物二聚体,看不到其他带,两张图片附如下,请教各位高手,我是那步有问题。
非常感谢各位大侠的赐教。

最后编辑于 2022-10-09 · 浏览 899