活体光学成像技术专栏| 活体成像中荧光染料的选择与成像

上期文章中，我们介绍了活体成像实验中荧光蛋白的选择方法，荧光蛋白在肿瘤细胞株筛选、病毒载体表达、转基因小鼠构建等应用中被广泛使用（链接）。在药物分布、纳米颗粒示踪、干细胞追踪等实验中，往往需要使用荧光染料对材料或细胞进行标记。 本期将为大家介绍活体成像实验中常用的荧光染料！Cy5.5（Ex/Em：678/701 nm）和Cy7（Ex/Em：749/776 nm）是对分子标记的最优选择之一；而DiD（Ex/Em：644/663 nm）、DiR（Ex/Em：748/780）染料则常用于活体成像实验中对细胞进行标记。

Cy5.5 、Cy7

Cy5.5 、Cy7避开了可见光区，在生物组织中的穿透深度较大。水和血红蛋白对700～900 nm的光吸收都很少，使得近红外光可以穿透组织内部多达15 cm。同时，这类染料还拥有紫外光区染料和同位素标记无法具备的生物安全性。

DiD、DiR细胞膜荧光探针

DiD、DiR细胞膜荧光探针DiD（红色荧光染料）是亲脂性荧光染料家族成员之一，它可以用来标记细胞膜和其它脂溶性生物结构。当DiD与细胞膜结合后其荧光强度大大增强，这类染料有着很高的淬灭常数和激发态寿命。一旦对细胞染色，这类染料在整个细胞膜上扩散，最佳浓度时可以使整个细胞膜染色。DiD可以用来对活细胞进行成像和流式分析。DiR（近红外荧光染料）是一个亲脂性的花青染料。常用于标记细胞质膜。DiR 的两个18-碳链插入到细胞膜，从而进行特定的、稳定的细胞染色，几乎不会发生细胞间的染料转移。DiR和其他细胞膜荧光染料如 DiI（橙色荧光），DiO（绿色荧光），DiD（红色荧光）配合使用，为多色成像和流式细胞分析提供了有效的工具。

当我们对分子或细胞成功标记后，需要选择合适的仪器进行成像获取实验数据。