做WB实验血浆里面怎么提取蛋白？

我最近在做WB实验，标本用的是血浆，测Notch信号通路上的相关蛋白，做了一个月了，一直没有跑出蛋白，很苦恼！ 按理来说血浆里含有大量蛋白，用BCA法测蛋白浓度是70ug/ul，为什么WB条带上就没有蛋白呢！刚开始以为是转膜转过了，但是后来降低转膜电流和缩短转膜时间，条带上还是没有蛋白。蛋白样本制备：直接将4X上样缓冲液加入血浆里，金属浴100°C 10分钟，刚开始是加了高效RIPA裂解液也是没有条带， 后来一想，RIPA是裂解组织和细胞的，血浆里面没有组织和细胞，所以就直接加4X上样缓冲液，我的电泳条件：恒压80V 半个小时，120V跑到底，转膜条件：恒流300mA，转1个小时，做了这么长时间内参（GAPDH）都没有跑不出来，现在怀疑是不是样本的问题，我查了些文献，用血浆做WB 的很少，求哪位老师指导一下怎么从血浆里提取蛋白？