纯化蛋白的条带总是与蛋白预期大小不符
发布于 2019-08-25 · 浏览 4698 · IP 广西广西
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用的是pet-32a的载体，目的片段大小351bp，116个aa，测序是正确的的，用的内切酶是EcoRⅠ和BamHⅠ ，没有加终止子，也就是32a自带的标签全留下了，用的两个his-tag。Expasy预测蛋白大小12kDa，加上载体自身标签大小，差不多30kDa左右，但总是在26kDa附近出现杂带，如图2，图3为图2的转模图。
为什么杂带也会带有组氨酸标签甚至比目的蛋白还要亮？
是杂带还是目的蛋白降解？
有没有大佬能帮个忙
图1 为探寻最适浓度咪唑梯度洗脱 20mM 50mM 100mM 150mM 200mM 300mM (100和150效果较好)
图二 为 过超滤管后跑胶图 2、3为10kda上 4为100kda上 5为50kda上 最后一孔为挂柱后流出液
图3 为图2的转膜图
最后编辑于 2022-10-09 · 浏览 4698
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