WB黑膜+白泳道

如图，大家讨论以上问题，共同学习。

1.AHR蛋白，105kd，一种胞浆受体，激活后转位到胞核，AHR为结合型蛋白，和3中蛋白组成复合体存在于胞质。

2.proteintech多克隆抗体，推荐1：500-1：1000，实际1：300-1：1500均试过。

3.上样量：10ul，20ul，30ul均尝试，蛋白浓度在3mg/ml以上。

4.结直肠组织，AHR在肠道广泛表达，不存在丰度太低，类似caspase-3等蛋白的问题。

5.封闭最高到过3h，问题依然如图。

6.转膜试过过夜，问题未解决。

7.抗体在买回来的第一次爆出来了，时间长达27min，背景干净，至第二次开始到第10次，均未在出现条带，全为黑膜或白色泳道，偶尔个别泳道有条带，同时伴随高背景，曝光时间均在1min左右，延长时间无变化。

8.在细胞中也无法检测，问题如图。

9.超声+15min煮沸均无改善。

10.除了一抗，所有条件基本全部排除。

是否是一抗出现问题？欢迎讨论。