MC3T3细胞培养测定ALP，I型胶原蛋白，矿化问题

均为转载，方便总结梳理借鉴~

要做MC3T3-E1细胞诱导分化的实验

1.诱导后3、7、10天检测ALP活性-----24孔板

2.诱导后7、14天检测分化相关基因OCN表达-----6孔板

3.诱导后14天茜素红染色-------6孔板

问题

（1）我的时间点设置是否合理？

（2）24孔板和6孔板种板密度为多少合适？文献的数据相差很大，想问做过的战友有没有较为可靠的数据，因为诱导后细胞增殖减慢，实验周期长达14天，所以不知道种多少合适？

（3）诱导的整个过程能不能传代？

（4）茜素红染色的浓度用0.1%，调至PH4.2还是8.5？

时间比较急，希望战友能指点一二，谢谢

(1)时间不够长，基本要做到3周。

（2）密度最好在70%以上，很多文献提到的都是完全汇合。

（3）不传代。

（4）茜素红不用调PH，但是我的经验是最好不要shake，就那样放着染色就好。

要做MC3T3-E1细胞诱导分化的实验

1.诱导后3、7、10天检测ALP活性-----24孔板

2.诱导后7、14天检测分化相关基因OCN表达-----6孔板

3.诱导后14天茜素红染色-------6孔板

问题

（1）我的时间点设置是否合理？

（2）24孔板和6孔板种板密度为多少合适？文献的数据相差很大，想问做过的战友有没有较为可靠的数据，因为诱导后细胞增殖减慢，实验周期长达14天，所以不知道种多少合适？

（3）诱导的整个过程能不能传代？

（4）茜素红染色的浓度用0.1%，调至PH4.2还是8.5？

时间比较急，希望战友能指点一二，谢谢

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（1）我的时间点设置是否合理？

个人觉得还行，茜素红染色是不是三周后较好？

（2）24孔板和6孔板种板密度为多少合适？文献的数据相差很大，想问做过的战友有没有较为可靠的数据，因为诱导后细胞增殖减慢，实验周期长达14天，所以不知道种多少合适？

密度超过板底50%就行。。

（3）诱导的整个过程能不能传代？

诱导中记得只换液就行。。

（4）茜素红染色的浓度用0.1%，调至PH4.2还是8.5？