基础实验：TTC染色详细计算分析过程，步骤详解（组图）

【TTC染色实验目的】: 通过TTC 染色观察梗死病变及梗死面积或体积。 

【TTC染色实验试剂】:2%红四氮唑溶液,PBS溶液,10%中性甲醛

【TTC染色实验流程】:

(1)断头法处死动物后迅速取脑或心脏(10min内),置于0-4℃PBS溶液中转移,- 20℃冰箱冷冻30 min。 

(2)切取脑片或者心脏切片,厚度为2 mm,将切片放入2%红四氮唑溶液中37℃避光水浴30 min,每5min轻微晃动容器,使充分染色。

(3)取出脑片或心脏切片用PBS溶液洗涤3-5 min,可马上拍照,用10% 中性甲醛固定脑片6 h。 

(4)选择每一切片的尾侧面用病理图文分析系统进行图像分析,测量每片的梗死面积和总面积,每层梗死体积为该层梗死面积和层厚的乘积,各层的梗死体积之和即为总的梗死体积。

1、原始图片数据(PS初步合图处理):

2、分析处理步骤:纯黑或纯白背景转换:(1)process (2)segmentation

(3)color cube based(4)white or black(5)吸管工具(不停点击切片位置,选取图片)(6)create preview image

纯黑背景转换图片结果:

纯白背景转换图片结果:

3、计算分析步骤:(1)measure(2)count/size

Select colors

调整颜色通道:HSI 通道 H:0-255;S:0-255;I:14-255

(1)Measure(2)Select Measure

设置面积选择大小(1)area (2)1000-1000000(可根据实际情况而定)

Count:开始计算

计算后界面显示:

查看计算结果和数据统计

数据查看与导出:

导出步骤一:data to file 导出步骤二:选择导出格式

导出数据查看:

4.梗死面积选定设置:HIS模式H:0-255; S:0-45; I:150-255(可根据实际情况调整)

设置完成,开始统计计算:count; 后面步骤和前面总面积计算一样进行,查看数据统计与数据文件导出,最后统计数据

总结总体面积与梗死面积,统计分析数据,得出结论。