CCK-8实验步骤及实验注意事项说明
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一、实验原理
活细胞中的脱氢酶能与CCK-8反应形成蓝色或黄色甲瓒化合物。甲瓒化合物的量与活细胞的数量成正比。通过酶标仪读取吸光值。细胞增殖越多越快，则吸光值越高；细胞毒性越大，则吸光值越低。可以计算细胞存活率、增殖率、抑制率，反应细胞增殖，药物对细胞的毒性等。CCK-8的应用范围包括：细胞生长曲线绘制，药物筛选，细胞增殖测定，细胞毒性测定，肿瘤药敏试验。
二、实验步骤
1、细胞种板：将对数生长期细胞用胰蛋白酶消化，配制成细胞悬液，每孔加入100 μl，使每孔细胞密度1000-5000个，边缘孔用无菌PBS填充。5%CO2，37℃培养至细胞贴壁铺满孔底。
2、按实验方案加入药物。每种处理建议设置4-6个复孔。
3、处理结束后，每个孔中分别加入10 μl CCK-8溶液，轻轻敲击培养板混匀，培养箱中孵育1-4小时。
4、使用酶标仪测定450nm光吸收值，按公式计算药物对细胞的抑制率。
三、注意事项
1、如果暂时不测定OD值，可向每孔中加入10μl 0.1M的HCl溶液或者1%SDS（w/v）溶液，室温避光保存，在24h内测定， 吸光值不会发生变化。
2、如果待测物质有氧化性或者还原性，可在加CCK-8之前除去旧培养液，并用培养基洗涤两次，然后加入新鲜培养基，以去除影响。
四、 结果分析
实验组：实验组细胞和CCK-8溶液的吸光度值
阴性对照：对照细胞和CCK-8溶液的吸光度值
空白对照：培养基和CCK-8溶液的吸光度值
增殖率（细胞活力）＝（实验组-空白对照）/（阴性对照-空白对照）×100％
抑制率（细胞毒性）＝ 1-（实验组- 空白对照）/（阴性对照-空白对照)×100％
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