WB显影出现点状和着色不均一

我配的是10%的分离胶和4%的浓缩胶，上样之前2000转离了一分钟，每个孔加10uL,先80V30min，然后120V60min，转膜是400mA，110min，牛奶封闭1h，一抗1：1000稀释，4度孵育过夜，二抗也是sigma的，1：5000稀释，室温1h，然后机器显影。中间步骤都PBST洗3*5min。如图中的条带，出现点状的频率不是很高，但着色不均一的问题出现频率很高。蛋白是LC3 I 和LC3 II，大小应该是18KD大小左右，。请帮我分析一下，谢谢。