细菌V3区PCR扩增做不出来啊！急求！

做的是菌群结构分析，需要扩增细菌16s rDNA 做了2个月都没有什么结果，毕业论文来不及了啊，急求！

之前用相同的DNA模板做16S全长的扩增可以用目标条带，但是V3区的就是怎么都做不出来。

有没有用相同引物的能告诉我你们用的体系和条件啊啊！跪谢了！

下面是我用的引物 体系 和条件。

引物：357F-GC/518R

357F-GC：

5’-CGCCCGCCGCGCGCGGCGGGCGGGGCGGGGGCACGGGGGGCCTACGGGAGGCAGCAG-3’；

518R

反应体系：采用25μL PCR体系：TaKaRa Taq (5 units/μL) 0.25μL，10×Buffer(Mg2+ free) 2.5μL，dNTPs 2μL，MgCl2 (25 mM) 1.5μL，模板DNA 2μL，上下游引物各0.5μL，无菌双蒸水15.75μL。

反应条件：94℃预变性4min；94℃变性1min，55℃退火50s，72℃延伸1min，扩增30个循环；最后72℃延伸10min。

PCR产物采用1.2%琼脂糖凝胶电泳检验。