【求助】蛋白纯化

各位大神，大家好，新人报道，我的目的蛋白加了his标签的，但是在纯化时不挂NI柱，柱子按照说明书重生过的。ps我用的是真核表达系统，有糖基化位点，麻烦各位帮我分析一下，谢谢。