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【求助】磷酸化WB选择PBST还是TBST

发布于 2015-03-20 · 浏览 9820 · IP 江苏江苏
这个帖子发布于 10 年零 51 天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。
百度了下,看到大多数说磷酸化WB,不适合用PBST,大多没说原因或者个人认为错误的原因。只有园子里有一个人说PBST最适合。
我想,按照反应平衡理论来说,溶液里有磷酸根,更容易是磷酸化和去磷酸化反应朝着磷酸化反应的方向进行。这样可以尽量维持原有的磷酸化水平。
有人说,PBS有磷酸根,我个人觉得一个游离的磷酸根这么小,不会和磷酸化抗体结合的吧?难道一个酸根基团能和抗体结合吗?如果这样的话,总蛋白里恐怕不是只有目的蛋白有磷酸化,有好多蛋白都有磷酸化的形式吧,而且有的目的蛋白磷酸化位点还不止一处,那不岂是要没了什么特异性了。
该如何选择PBST还是TBST呢?
请大家给个建议和解释。或者实验经历和经验。
做磷酸化WB,还有哪些容易被忽视的细节??




最后编辑于 2015-03-20 · 浏览 9820

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