【专题讨论】请教大家关于免疫共沉淀的问题

IP： IgG TLR4 TLR4

WB:TLR4
大家看看我的IP怎么做成这样呢，这么多条带？
我要验证TLR4-蛋白的结合，用TLR4抗体做IP，IgG为对照，之后用TLR4做WB。
IP用的是millipore的proteinG,方法如下：
1.用PBS稀释细胞裂解液至总蛋白浓度为1ug/ul
2.在500-1000ug细胞裂解液中加入抗体
3.4℃轻摇过夜
4.加入20ul洗涤过的proteinG琼脂糖珠
5.4℃轻摇2h
6.14000rpm离心5s，收集琼脂糖珠，弃掉上清。用预冷的PBS洗涤琼脂糖珠3次
7.用60ul2×Laemmli sample buffer重悬琼脂糖珠
8.煮沸琼脂糖珠5min
9.离心后收集上清
10.用上清跑SDS-PAGE或WB