【求助】WB结果背景很高，条带位置偏白，但是也看不清楚
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最右侧为Marker位置上下各两条（25和15KD），蛋白为19KD。操作步骤见下：
①设定电泳仪60V跑到底。蛋白上样量为20ul。蛋白浓度为450ug/ml，但是杂蛋白比较多。
②裁膜（裁膜前准备好冰盆，使转膜液提前预冷），横向8.5cm，纵向5cm。
③ 转膜时，保持电流在130mA，，转膜液提前预冷。时间75min。
封闭
①5g脱脂奶粉+50mlTBS+1.25ml Tween-20（20%）（终浓度0.5%）。2H。
洗膜：TBS洗膜3次，每次10min。
一抗孵育：置于孵育盒中4℃过夜（可拿改良版震荡机震荡过夜），16h。一抗为人血清。比例上图为1:100，下图为1:200稀释。
洗膜：
①TBST洗膜2次，每次10min。
②10%封闭液洗膜2次，每次10min或直接洗1次，20min，封闭液不能有太多泡沫。
二抗孵育：康为公司的羊抗人IG-G抗体1:10000稀释。孵育1H。
TBST洗膜4次，每次20min
最后ECL发光液看结果。
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