【求助】中性粒细胞趋化实验方法步骤

在做中性粒细胞趋化实验，用的Transwell 板(8um,24孔），趋化2小时，多聚甲醛固定10min，结晶紫染色15min，但是膜上细胞没有染上色，而且不少细胞掉到下室，现急请教几个问题:
1、选择膜孔径8um的Transwell 板是不是不合适，看很多文献用3um的，应该选哪种？
2、上室下室个加多少液体？
3、固定及染色的具体方法？
4、细胞应该附在膜下方还是到下室，都有的话如何计数？