【求助】条带出不来是怎么回事呢？

各位大侠，我最近开始做WB，β-actin的条带很好，但是目的蛋白都很浅，或者条带出的不全，再不就是没有出来条带，不知道是怎么回事，我一抗用的CST的抗体1:1000，二抗1：5000。请各位大侠帮忙支点招吧。