【求助】电转高手来指导,建库的时候电转效率极低
我用来做E.Coli的电转实验,结果,发现,在转pUC19质粒的时候,效率挺高,10的9-10次方。但在转连接产物的时候,却很低,长的克隆一般也就10个左右。重做了,或买了电转感受态,还是这样。但同样的连接产物,若是用化转,却长的还不错,基本上能到100-1000个克隆,有时候更高。
还以为机器不行,又用了隔壁实验室的新买的Biorad的电转仪,结果基本一样,只是电转连接产物的时候,克隆更少,基本上就2-3个。
昨天用Biorad电转仪做的:
我酶切回收的时候是用的Axygen的盒子,片段(5ng/ml), 载体(15ng/ml), 片段和载体的长度大概是1:4,片段加了1uL,载体加了0.5uL,T4连接酶0.5uL(Roche).
电转长了两个克隆;化转没细数,大概500个克隆以上。(电转1uL,化转5uL)
最后编辑于 2022-10-09 · 浏览 7084