RPA检测技术干货分享——在实验室里需要注意的事项（一）

在RPA或者RAPID检测中，污染问题是最常见的问题，也是让实验人员最头疼的事情，根据个人多年核酸检测领域的经验以及综合相关常见的问题，总结了以下几个方面：1.试剂污染；2.扩增产物污染；3.气溶胶污染；4.克隆质粒污染。

首先来谈谈第一个问题——试剂污染，试剂污染引起的主要原因是在试剂配制过程中，由于加样枪、容器、水以及其他溶液被核酸模板污染。一般这个问题比较容易被实验人员所忽视，但这是一个十分重要的因素，下面来分享一下在避免试剂污染问题中的一些建议：

① 试剂母液分装成小管子保存

这里特别强调这一点，是因为很多实验人员都认为母液不太会被污染，但一旦母液污染，造成的影响更大，因此为了强调，单独把这一条列出来，母液分装有两个目的，一是为了防止发生污染后，有备用的试剂可用，二是分装成小管子，也有利于避免反复冻融造成的试剂失效。

② 根据使用情况，尽量将试剂分装成小管子保存

这里要强调的是，根据实验的频率和需求，可将试剂分装成便于操作和使用的量。比如每次实验都做8个反应，那么可用分装成10个的用量分装起来，用多少取多少，用完便可丢弃，每次都用“新鲜”的试剂，而不是分装成7个用量，每次做实验的时候还有可能发生缺少情况，操作不方便。

③ 空间上杜绝试剂和核酸模板接触

做核酸扩增的试剂，一定要“干净”，即不能有任何的核酸模板。空间上的分隔是最有效的方式，使两者不见面，这样试剂被污染的概率将会大大降低，所以，空间上的隔离，是最有效也是最必须的方式之一。

④ 试剂存放在“上风向”的位置

这一点是最容易被实验人员忽略的，虽然有时候空间上隔离了，但有可能存放试剂的地方，很容易被核酸密集地方的空气污染，从而导致试剂的污染，这种污染还无从查找，因此在设计试剂存放位置的时候，也要在潜在的空气流动上注意，把试剂放置在“上风向”的位置。

核酸扩增的污染问题是普遍问题，只要实验人员严格按照实验流程操作，相信可以获得理想的实验结果。