【求助】小鼠分离脾脏细胞做流式的步骤

最近要测患病的小鼠脾脏中的Treg细胞比例，只是做流式，有一些问题不很清楚：

1. 小鼠外周血的Treg细胞检测需要小鼠的外周血量一般需要多少？肝素抗凝，然后加抗体孵育，然后裂红，还是先分PBMC后，再做后一步的检测？有没有园友做过相关的，有一个成熟的流程？

2. 小鼠脾脏Treg细胞的检测，第一步是分离脾细胞，通过什么方法分离效果较好？红细胞裂解液？还是淋巴细胞分离液？

由于初涉这个部分，望园友指教！